پیشنهاد میگردد محققین گرامی یا دانشجویان عزیزی که میخواهند در این زمینه فعالیت داشته باشند اقدام به بررسی غلظتهای یالاتر این هورمون بر روی ریزغدهزایی گیاه سیبزمینی نمایند. غلظتهای پیشنهادی (۰، ۵/۲، ۵، ۵/۷، ۱۰، ۵/۱۲ و ۱۵ میلیگرم در لیتر) میباشند.
شکل ۵-۹) ریزغدهزایی در حضور هورمون ۲iP
۵-۱۰- آزمایش ۱۰: بررسی اثر BAP بر روی تولید ریزغده:
بر طبق نتایج بدست آمده هورمون BAP دارای اثر مثبت بر ریزغدهزایی ارقام سیبزمینی به کار رفته در آزمایش میباشد. تمامی ارقام بیشترین میزان ریزغدهزایی را در تیمار شماره سه (غلظت ۵ میلیگرم در لیتر BAP) نشان دادند، بررسیهای آماری نیز حاکی از وجود تفاوت معنیدار بین این تیمار و سایر تیمارهای بکار رفته در این آزمایش بود. نتایج حاصل از این آزمایش با نتایج عبادی و ایرانبخش (۲۰۱۱) مطابقت داشت.
با توجه به افزایش معنیدار تعداد ریزغده توسط هورمون BAP این هورمون برای بررسی اثر متقابل با سایر هورمونها انتخاب گردید. غلظت ۵ میلیگرم در لیتر BAP به عنوان غلظت برتر و غلظت ۱۰ میلیگرم در لیتر هورمون BAP به همراه محیط کشت فاقد هورمون به عنوان سایر سطوح تیماری برتر به مرحله بررسی اثر متقابل برده شدند.
شکل ۵-۱۰) ریزغدهزایی در حضور هورمون BAP
۵-۱۱- آزمایش ۱۱: بررسی اثر CCC بر روی تولید ریزغده:
بر طبق نتایج بدست آمده هورمون CCC دارای اثر مثبت بر ریزغدهزایی ارقام سیبزمینی به کار رفته در آزمایش میباشد. تمامی ارقام بیشترین میزان ریزغدهزایی را در تیمار شماره سه (غلظت ۵۰۰ میلیگرم در لیتر CCC) نشان دادند، بررسیهای آماری نیز حاکی از وجود تفاوت معنیدار بین این تیمار و سایر تیمارهای بکار رفته در این آزمایش بود. نتایج این تحقیق با نتایج حسین[۱۵۰] و همکارانش (۲۰۰۶) مطابقت نداشت، علت این امر این بود که حسین و همکارانش از غلظتهای بیش از ۲۵۰ میلیگرم در لیتر در تحقیقاتشان استفاده نکرده بودند.
با توجه به افزایش معنیدار تعداد ریزغده توسط هورمون CCC این هورمون برای بررسی اثر متقابل با سایر هورمونها انتخاب گردید. غلظت ۵۰۰ میلیگرم در لیتر CCC به عنوان غلظت برتر و غلظت ۱۰۰۰ میلیگرم در لیتر هورمون CCC به همراه محیط کشت فاقد هورمون به عنوان سایر سطوح تیماری برتر به مرحله بررسی اثر متقابل برده شدند.
شکل ۵-۱۱) ریزغدهزایی در حضور هورمون CCC
۵-۱۲- آزمایش ۱۲: بررسی اثر GA3 بر روی تولید ریزغده:
نتیجه آزمایش بیانگر نقش منفی اثرات هورمون GA3 در تشکیل ریزغده سیبزمینی است. نتایج آزمایش توسط تحقیقات اطرشی و همکاران (۱۳۸۹) و وانگ و هو (۱۹۸۲) تایید میگردد. غلظتهای مختلف هورمون GA3 در شرایط تاریکی سبب تحریک افزایش شاخهزایی در گیاهچه گردید. شاخه های تولید شده به علت عدم وجود نور فاقد کلروفیل به رنگ سفید دیده شدند (شکل ۵-۱۲).
شکل ۵-۱۲) تحریک شاخهزایی در محیط کشت حاوی هورمون GA3 و شرایط تاریکی
۵-۱۳- آزمایش ۱۳: بررسی اثر NAA بر روی تولید ریزغده:
بر طبق نتایج بدست آمده هورمون NAA دارای اثر مثبت بر ریزغدهزایی ارقام سیبزمینی به کار رفته در آزمایش میباشد. تمامی ارقام بیشترین میزان ریزغدهزایی را در تیمار شماره دوم (غلظت ۵/۰ میلیگرم در لیتر NAA) نشان دادند، بررسیهای آماری نیز حاکی از وجود تفاوت معنیدار بین این تیمار و سایر تیمارهای بکار رفته در این آزمایش بود.
با توجه به افزایش معنیدار همه صفات توسط تیمار دوم (غلظت ۵/۰ میلیگرم در لیتر NAA)، این تیمار به عنوان تیمار برتر برای آزمایشهای مرحله اثر متقابل انتخاب گردید. علاوه بر تیمار دوم، تیمارهای اول و سوم نیز برای بررسیهای بیشتر و دقیقتر جهت حضور در آزمایشهای اثر متقابل هورمونهای برتر بر روی ریزغدهزایی ارقام سیبزمینی انتخاب گردیدند.
شکل ۵-۱۳) ریزغدهزایی در حضور هورمون NAA
۵-۱۴-آزمایش ۱۴: بررسی اثر متقابل هورمونهای برتر بر روی تولید ریزغده:
با توجه به نتایج بهینهسازی تیمارهای آزمایش، محیط کشت مناسب برای تولید ریزغده و سایر صفات موثر بر آن (اندازه و وزن ریزغده و تعداد چشم در آن) برای رقم ساوالان محیط کشت MS همراه با غلظت ۱۰۰۰ میلیگرم در لیتر CCC (نمودار ۵-۵)، برای رقم سانته محیط کشت MS همراه با ۱۰۰۰ میلیگرم در لیتر CCC با مطلوبیت ۷۴۳/۰ (نمودار ۵-۶)، برای رقم آگریا محیط کشت MS همراه با غلظت ۹۵/۹۹۹ میلیگرم در لیتر CCC نمودار (۵-۷) و برای رقم مارکیز محیط کشت MS همراه با غلظت ۱۰۰۰ میلیگرم در لیتر CCC و ۰۲/۰ میلیگرم در لیتر NAA (نمودار ۵-۸) پیشنهاد میگردد.
نتایج حاصل از آزمایش با نتایج تاور و همکارانش (۱۹۸۵) مطابقت نداشت. این محققین محیط کشت مناسب جهت ریزغدهزایی را محیط کشت MS همراه با ۵ میلیگرم در لیتر BAP و ۵۰۰ میلیگرم در لیتر CCC معرفی نمودند این در حالی است که در این آزمایش پس از بهینهسازی تیماری محیط کشت متناسب با هر رقم برای تولید حداکثری ریزغده معرفی گردید.
عبادی و ایرانبخش (۲۰۱۱) بیان داشتند بیشترین میزان تولید ریزغده برای رقم در محیط کشت MS حاوی ۵ میلیگرم در لیتر BAP حاصل می آید که با نتایج این آزمایش تطابق نداشت. علت این عدم تطابق عدم حضور هورمون CCC در آزمایشهای این محققین بود. اطرشی و همکارانش (۱۳۸۹) بیان داشتند که حضور هورمون CCC در محیط کشت سبب افزایش تعداد و وزن ریزغده میگردد که با نتایج حاصل از این آزمایش مطابقت دارد.
نمودار۵-۵) نمودار بهینهسازی اثر متقابل هورمونها بر روی تولید و رشد ریزغده رقم ساوالان
نمودار۵-۶) نمودار بهینهسازی اثر متقابل هورمونها بر روی تولید و رشد ریزغده رقم سانته
نمودار۵-۷) نمودار بهینهسازی اثر متقابل هورمونها بر روی تولید و رشد ریزغده رقم آگریا
نمودار۵-۸) نمودار بهینهسازی اثر متقابل هورمونها بر روی تولید و رشد ریزغده رقم مارکیز
مقایسه تولید ریزغده در محیطهای بهینه شده بین ارقام مختلف نشان میدهد که رقم سانته با مطلوبیت ۷۴۳/۰ بیشترین رشد تولید ریزغده را در بین ارقام مختلف دارا میباشد. پس از رقم سانته ارقام آگریا با مطلوبیت ۵۹۶/۰، ساوالان با مطلوبیت ۵۳۷/۰ و در آخر رقم مارکیز با مطلوبیت ۲۸۱/۰ قرار دارند (شکل ۵-۱۴).
شکل ۵-۱۴) ریزغدهزایی توسط ارقام مختلف. A: ساوالان، B: سانته، C: آگریا و D: مارکیز.
مقایسه اندازه ریزغده تولیدی توسط ارقام مختلف نشان داد که رقم مارکیز تولید ریزغده با اندازه بزرگتر نسبت به سایر ارقام می نماید. پس از رقم مارکیز به ترتیب ارقام سانته، آگریا و ساوالان قرار دارند (شکل ۵-۱۵).
شکل ۵-۱۵) مقایسه اندازه ریزغدههای تولیدی. A: ساوالان، B: سانته، C: آگریا و D: مارکیز.
جمعبندی و پیشنهادات:
-
- مرحله ضدعفونی:
فرایند ضدعفونی سطحی مواد گیاهی یکی از مهمترین مراحل در انجام طرحهای کشت بافت و انتقال گیاهچه به محیط کشت میباشد که اگر گیاه دچار آلودگی سیستمیک نباشد بهترین، سریعترین و کم هزینهترین روش برای انتقال گیاهچه به محیط کشت و عاری از آلودگی (ویروس، قارچ و باکتری) نمودن ریز نمونهها نسبت به روشهای کشت مریستم و باززایی از کالوس میباشد.
با مطالعه منابع مختلف متوجه شده که هر محققی نحوه خاص و یا مقدار متفاوتی از مواد را نسبت به دیگر محققان برای ضدعفونی مواد گیاهی پیشنهاد مینماید که علت این امر مربوط به زمان یا فصل انجام آزمایشها، نوع بافت ریزنمونه، سن فیزیولوژیک، شرایط نگهداری و سلامت گیاه و میزان آلودگی گیاه با عوامل ایجاد آلودگی میباشد.
با توجه به جمیع شرایط پیشنهاد مینماید که برای انجام فرایند ضدعفونی به ترتیب زیر عمل نمایید:
-
- انتخاب گیاه مادری سالم برای تهیه ریزنمونه و تا حد امکان عاری از آلودگی
-
- شستشوی ریزنمونهها با آب جاری و دو قطره مایع دستشویی به مدت ۳۰ دقیقه
-
- ضدعفونی ریزنمونهها با الکل ۷۰% به مدت ۶۰ ثانیه
-
- ضدعفونی گیاه با هیپوکلریت سدیم و دو قطره توین ۸۰ (نکته قابل توجه اینکه میزان یا درصد استفاده از هیپوکلریت سدیم و همچنین زمان استفاده از آن بسته به شرایط ریزنمونه که پیشتر گفته شد متفاوت میباشد و نمی توان مقدار ثابتی را برای آن پیشنهاد نمود).
-
- سه مرتبه آب شویی با آب مقطر استریل شده.
[شنبه 1400-08-22] [ 03:17:00 ب.ظ ]
|